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移液器作為實驗室核心移液工具，其性能參數（如精度、重復性、量程適配性）與操作體驗（如活塞阻力、吸液穩定性）對實驗結果至關重要。傳統移液器在微量移液（≤10μL）時易出現液體殘留、移液偏差較大等問題，尤其在單細胞分離等對操作精準度要求極高的場景中，常導致目標細胞丟失或非目標細胞污染。博清生物科技（南京）有限公司研發的單道移液器針對微量操作場景優化設計，采用高精度活塞與防腐蝕密封結構，搭載自適應量程校準技術，具備更優的移液精度和重復性。

一、材料與方法

（一）實驗儀器與試劑

1、核心儀器：博清生物單道移液器；流式細胞分選儀；微量核酸提取試劑盒；實時熒光定量PCR儀；生物分析儀。

2、實驗試劑：DMEM培養基；胎牛血清；PBS緩沖液；RNA酶抑制劑；逆轉錄試劑盒；qPCR混合液；β-actin引物。

3、細胞樣本：人乳腺癌MCF-7細胞系。

（二）移液器性能基礎驗證

1、移液精度與重復性檢測

參照相應標準，選取3個關鍵量程（1μL、10μL、100μL），采用去離子水為樣品，在25℃、濕度50%環境下，每個量程重復移液10次，通過電子天平稱重計算實際移液體積，統計均值、標準差（SD）及變異系數（CV），驗證精度（實際體積與設定體積偏差）和重復性（CV值）。同時以某品牌移液器作為對照。

2、液體殘留檢測

選取10μL量程，移取0.1%亞甲基藍溶液，將液體完全排出后，用50μL無水乙醇沖洗吸頭內部，通過紫外分光光度計檢測沖洗液中染料吸光度，計算殘留率。

（三）單細胞分離實驗

1、細胞預處理

MCF-7細胞常規培養至對數生長期，胰酶消化后用含10% FBS的DMEM培養基重懸，調整細胞濃度至1×10?cells/mL，經40μm細胞篩過濾去除聚集體。

2、單細胞分選與捕獲

采用流式細胞分選儀標記CD44?目標細胞，通過博清生物單道移液器（10μL量程）將分選后的單細胞逐一轉移至96孔板（每孔含10μL含RNA酶抑制劑的裂解液）。操作過程中控制吸液速度為2檔、排液速度為1檔，避免液體飛濺。同時使用對照移液器進行平行實驗，每組設置3個復孔，每孔計數目標細胞捕獲數量，計算捕獲成功率。

（四）微量RNA提取與質量檢測

采用微量核酸提取試劑盒對捕獲的單細胞進行RNA提取，全程使用博清生物單道移液器（1-10μL量程）進行試劑添加、液體轉移等操作。提取完成后，通過生物分析儀檢測RNA完整性數（RIN），并采用紫外分光光度計檢測A260/A280比值（1.8-2.0為合格）。

（五）qPCR驗證實驗

1、cDNA合成

取1μL單細胞RNA進行逆轉錄反應，體系總體積10μL，使用博清生物單道移液器精準添加引物、酶、緩沖液等試劑，反應條件：25℃ 10min，50℃ 30min，85℃ 5min。

2、qPCR擴增

以β-actin為內參基因，設計特異性引物。qPCR反應體系20μL，其中cDNA模板2μL，使用博清生物單道移液器精準分配反應液至384孔板，每個樣品設置3個技術重復。擴增條件：95℃ 10min，隨后95℃ 15s、60℃ 1min，40個循環。記錄Ct值，計算變異系數。

二、結果

（一）移液器基礎性能驗證結果

博清生物單道移液器在不同量程下的移液精度與重復性均表現優異，且顯著優于對照移液器（P<0.05）。1μL量程下，博清移液器實際移液體積均值為0.98±0.01μL，CV值為0.82%，而對照移液器實際體積為0.92±0.03μL，CV值為3.26%；10μL和100μL量程下，博清生物移液器CV值分別為0.57%和0.31%，均低于對照移液器。液體殘留檢測顯示，博清生物移液器殘留率為0.32%±0.05%，顯著低于對照移液器的1.21%±0.13%（P<0.01）。

（二）單細胞捕獲成功率

博清生物單道移液器組的單細胞捕獲成功率為92.3%±2.1%，顯著高于對照移液器組的81.7%±3.5%（t=4.62，P<0.01）。鏡檢結果顯示，博清生物移液器組96孔板中單個細胞孔占比達90.5%，無細胞孔占比6.3%，多細胞孔占比3.2%；而對照移液器組單個細胞孔占比78.1%，無細胞孔占比12.5%，多細胞孔占比9.4%。

（三）RNA提取質量

博清移液器組提取的單細胞RNA樣本RIN均值為8.6±0.3，A260/A280比值為1.92±0.05，均滿足scRNA-seq建庫對RNA質量的要求（RIN≥7.0）；對照移液器組RIN均值為7.8±0.5，A260/A280比值為1.85±0.08，兩組RIN值差異具有統計學意義（t=3.87，P<0.05）。

（四）qPCR實驗結果

博清生物移液器組β-actin基因Ct值為28.3±0.4，CV值為1.41%；對照移液器組Ct值為29.1±0.8，CV值為2.75%。兩組Ct值CV值差異具有統計學意義（t=2.95，P<0.05），表明博清生物移液器組實驗重復性更優。

三、討論

單細胞研究的核心挑戰之一是如何在微量操作中維持細胞完整性與核酸穩定性，而移液器的性能直接決定了實驗流程的可控性。本研究針對博清生物單道移液器的核心性能及在單細胞研究中的應用場景進行系統驗證，結果表明該儀器在多個關鍵指標上表現突出。

在基礎性能方面，博清生物單道移液器通過優化活塞結構與密封技術，實現了全量程范圍內的高精準度與強重復性，1μL微量移液時CV值僅0.82%，顯著優于傳統移液器，這一優勢在單細胞分離等需要精準轉移微量液體的場景中尤為重要。液體殘留率低（0.32%）的特點可減少試劑浪費與交叉污染，降低后續核酸檢測的背景干擾，這與該儀器采用的防殘留吸頭適配設計密切相關。

在單細胞捕獲實驗中，博清生物移液器92.3%的捕獲成功率顯著高于對照儀器，這得益于其平穩的吸液/排液控制與精準的量程校準。單細胞分離過程中，吸液速度過快易導致細胞損傷，排液不完全則會造成細胞丟失，而博清生物移液器的多檔速度調節功能與高密封性能有效解決了這一問題，減少了無細胞孔和多細胞孔的比例，為后續單細胞分析提供了高質量的樣品基礎。

RNA質量是單細胞測序成功的關鍵，本研究中博清生物移液器組提取的RNA RIN均值達8.6，表明其在微量試劑添加、液體轉移過程中能有效保護RNA完整性，避免因操作不當導致的核酸降解。這一結果與該儀器的低液體殘留特性相關，減少了RNA酶污染的風險，同時精準的移液操作確保了提取試劑比例的準確性，提升了核酸提取效率。

qPCR驗證實驗中，博清生物移液器組Ct值CV值僅1.41%，體現了其在高通量檢測中的優異重復性。在單細胞qPCR等對反應體系均一性要求極高的實驗中，移液偏差會導致Ct值離散度增大，影響基因表達定量的可靠性，而博清生物移液器的高重復性可有效降低實驗誤差，提升數據可信度。

綜上，博清生物科技（南京）有限公司研發的單道移液器通過在精準度、重復性、防殘留等方面的技術優化，能夠完美適配單細胞研究中的微量操作需求，從單細胞分離、核酸提取到后續檢測的全流程提供穩定支撐。與傳統移液器相比，其在提升實驗效率、保障數據質量方面具有顯著優勢，有望成為單細胞生物學、精準醫學等領域的理想實驗工具。

本研究系統驗證了博清生物科技（南京）有限公司研發的單道移液器在單細胞研究中的應用性能，證實該儀器具有高移液精度、強重復性、低液體殘留等核心優勢，可有效提升單細胞捕獲成功率、保障RNA完整性及qPCR檢測重復性，滿足單細胞分離、微量核酸分析等關鍵實驗環節的技術要求。博清生物單道移液器憑借其優異的性能與良好的操作適配性，為單細胞研究提供了穩定可靠的工具支持，具有廣闊的科研應用前景。